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簡單介紹下細(xì)胞爬片的使用步驟

發(fā)布日期: 2018-07-30
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   簡單介紹下細(xì)胞爬片的使用步驟
  細(xì)胞爬片步驟
  (1)儲存液:1:10稀釋液可以保存在4℃里,三個(gè)月內(nèi)仍然可以使用。稀釋、儲存和吸取多聚賴氨酸要使用塑料制品。
  工作液:0.1%(w/v)PLL,用移液槍吸取0.3ml PLL+3ml無菌去離子水,混勻放于10ml無菌塑料離心管中。封口模密封后4℃存放。
  (2)無菌處理:PLL不可以高溫消毒,故應(yīng)過濾除菌分裝于無菌處理的細(xì)胞凍存管內(nèi),1ml/管,封口模密封,4℃保存。另外,準(zhǔn)備無菌去離子水50ml。
  細(xì)胞爬片方法與技巧
  爬片的準(zhǔn)備:
  1、爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
  2、應(yīng)用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;
  3、將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再用三蒸水沖洗3遍(個(gè)人認(rèn)為主要目的是沖洗干凈就可以了),放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦,要不然就„„)中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
  培養(yǎng)板的準(zhǔn)備:
  1、泡酸過夜
  2、沖洗,烘干(1、2步驟與前大致相同)
  3、放入超凈工作臺用紫外線照1~2小時(shí)就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,若細(xì)胞貼壁能力不強(qiáng),可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強(qiáng)的話,就可以省略了,進(jìn)行紫外線消毒)
  注:此步自己的經(jīng)驗(yàn)是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi),緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的:
  浸過PBS的爬片依靠表面的液體,可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密,以利于細(xì)胞長到爬片上。(自己剛開始做的時(shí)候,經(jīng)常就是細(xì)胞全都長在了爬片與培養(yǎng)板之間,爬片上細(xì)胞罕見。)
  細(xì)胞爬片:
  1、胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)
  2、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
  3、第二天即可進(jìn)行干預(yù)措施
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